葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
對葉綠素的研究一直是人們極其關(guān)注的課題。葉綠素含量測定方法主要有分光光度法和活體葉綠素儀法兩大類,后來又發(fā)展了光聲光譜法。但是,用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標(biāo),并且不同種類植物葉片中的色素指標(biāo)與實際葉綠素含量之間的關(guān)系方程式不同,即不能用一種關(guān)系來轉(zhuǎn)換不同植物的色素含量。在日常實驗中普遍采用分光光度法,用的較多的是Arnon法。Arnon法需要把植物材料研磨,經(jīng)過過濾或離心長,在操除渣、移液、定容、比色等過程,工作量大,提取時間作過程中誤差較大,且易受光氧化的破壞,不適于對田間大量樣品的測定和大量葉綠素的提取,并且也不適合大批量樣本的應(yīng)急檢測。后來又提出了丙酮乙醇混合液浸提法,證明利用混合液進(jìn)行葉綠素浸提的可行性。進(jìn)一步研究后發(fā)現(xiàn),混合液法比傳統(tǒng)Arnon法提取葉綠素效率高,穩(wěn)定性好。
選材：剪取葉片,洗凈后棄除葉柄和中脈,然后用紗布或吸水紙將葉片表面的水分吸干。為了試驗的精確度更高,我們在取樣時僅取每片葉的中間部位,并用SPAD-502測定其葉綠素相對含量值,使其偏差保持在(-5,+5)之間,超出范圍者棄掉。把挑選的葉片剪成小于2mm碎條,混勻。分兩份,一份在室溫(25℃)下,立即用研磨法(80%丙酮,95%乙醇)和直接浸提法(8種提取液)提取葉綠素;另一份每次用千分之一天平精準(zhǔn)稱取(200 mg,稱取24份;1 g,稱取6份),分別裝袋,密封好,儲放到冰箱中備用。為增加不同測定方法之間可比性,樣品在冷凍前稱量分裝好。
浸提法:分別于容量瓶中加入15mL提取液,把葉片剪成寬度小于2mm的細(xì)絲或小塊,混勻,分別準(zhǔn)確稱取200mg放入盛有提取液的容量瓶中,封口,置于黑暗條件下直接浸提。研磨法每個處理重復(fù)3次。室溫試驗時,按8種提取液分8組,每組12個50mL的容量瓶,分別按照上述方法加入葉片和各浸提液,并計時,在室溫黑暗條件下直接浸提葉綠素,并不時搖動。分別于10h、13h、16h和48h時,每組各取出3個容量瓶,定容至50mL后在645nm和663nm波長下測定吸光度值。取出冷凍20h的葉片按照如上方法和程序或研磨或浸提。每個處理3個重復(fù),浸提在50℃水浴中進(jìn)行,用肉眼觀察葉組織完全變白,即說明浸提完全,取出冷卻后定容,在645 nm和663 nm波長下測定吸光度值。
葉綠素儀：現(xiàn)在市面上最流行的莫過于SPAD502。SPAD502是有日本柯尼卡美能達(dá)研制生產(chǎn)的，SPAD502通過測量葉子對兩個波長段里的吸收率，來評估當(dāng)前葉子中的葉綠素的相對含量。該儀器擁有小巧的機(jī)身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋并帶到現(xiàn)場進(jìn)行測量，因此又叫做手持葉綠素儀。葉綠素儀操作也非常方便，你只需將葉片插入并合上測量探頭即可，無需將葉片剪下，這樣就可以在作物的生長過程中全程對特定的葉片進(jìn)行監(jiān)測，從而得到更科學(xué)的分析結(jié)果。因此，葉綠素能夠?qū)θ~片進(jìn)行無損測定，保護(hù)了葉片本身。
這兩種方法各有優(yōu)勢，浸提法提取時受很多試劑的影響，因此在使用試劑時一定要謹(jǐn)慎，另外，浸提法測定時如果采用冷凍處理，可以縮短浸提時間，但是其測定值會變低。而用SPAD502測定則操作簡單，結(jié)果精確，但是該儀器價格昂貴。因此我們要根據(jù)實際需求，來選擇測定方法。
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